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立即博v88双酶切质粒后电泳 的问题

日期:2019-09-03 19:33

  很显然是质粒发生了自连啦。切开的2个质粒连起来了,因此相当于2个质粒的大小。你需采用磷酸化避免自连发生。

  展开全部请首先检查酶切前空载体的大小。最好先在KpnI单切以后,BglII二次酶切前,先检测一下,确认质粒的实际大小;确认无误了再进行BglII二次酶切。分段进行验证排查。

  单纯的酶切后没有连接酶时,能引发自连的说法,理论上也许有;不过从我的7,8年的实验经历中,从来没有听说过谁真的出现过,更是从来没有见过。

  从我以往的经历出发,最可能出现的问题就是使用了错误的质粒,或者质粒中有所不知道的外源序列。一般情况下我会依照质粒图谱,立即博v88对质粒进行酶切或者PCR确认。甚至是抽质粒时出现的基因组碎片污染都有可能。